血液学讲座四常用细胞化学染色技术1

◇细胞化学染色:

是细胞学和化学相结合而形成的一门科学,是以细胞形态学为基础,结合运用化学反应的原理对细胞内的各种化学成分(如酶类、脂类、铁、蛋白质、核酸等),进行定位、定性、半定量分析的方法。

◇基本步骤

固定→显示→复染

一、铁染色

酸性

Fe3++亚铁氰化钾——→亚铁氰化铁

(普鲁士蓝)

固定:选髓粒丰富的骨髓片,用甲醇固定10min,水洗待干

显示:用新配制的亚铁氰化钾染液C,染色30min

水洗:流水冲洗至少5min

复染:核固红染液复染3~5min

镜检:流水冲洗,干后镜检。

◇细胞外铁:骨髓小粒巨噬细胞中的铁;

◇细胞内铁:红细胞胞质中含有的铁;

◇铁粒幼红细胞:胞质中含有铁粒的中、晚幼红细胞;

◇铁粒红细胞:含铁粒的成熟红细胞。

1.细胞外铁:低倍镜观察

↑(–):无铁粒可见

↑(+):少数铁粒或铁小珠

↑(++)有较多的铁粒和小珠

↑(+++)有许多铁粒、小珠和许多蓝色小块

↑(++++):有极多的铁粒、小珠和许多蓝色小块,密集成堆

2.细胞内铁:油镜下计数个中、晚幼红细胞,计算胞质中含有蓝色颗粒的细胞(铁粒幼红细胞)的百分率。

Ⅰ型:仅含1~2个铁颗粒。

Ⅱ型:含3~5个铁颗粒。

Ⅲ型:含6~10个铁颗粒。

Ⅳ型:10个铁颗粒。

环形铁粒幼红细胞:指幼红细胞胞质内含铁颗粒6个以上,并环绕细胞核排列超过核周径2/3以上者。

细胞外铁:+~++,多为++。

铁粒幼红细胞:12%~44%,以Ⅰ型为主,仅见少数Ⅱ型,不见环形铁粒幼红细胞。

1.缺铁性贫血

↑细胞外铁:明显减少或阴性。

↑细胞内铁:阳性率减低或0

铁剂治疗后内外铁均增多。

2.诊断铁粒幼细胞性贫血

↑外铁:明显增多。

↑环形铁粒幼细胞:增多。

3.骨髓增生异常综合征

↑伴环形铁粒幼红细胞增多的难治性贫血,环形铁粒幼红细胞15%,细胞外铁增加。

4.非缺铁性贫血

细胞外铁:正常或增加

细胞内铁:铁粒幼红细胞增加,以Ⅰ、Ⅱ型为主。

二、过氧化物酶(POX)染色

染色方法:

◇二氨基联苯胺法(DAB法)

◇过氧化物酶氨基-甲基卡巴唑法

◇二盐酸联苯胺法

◇四甲基联苯胺法

骨髓片或血片

基质液0.5ml,1min

过氧化氢0.7ml

染色6min

冲洗

干后镜检。

强阳性:胞质中粗大深蓝绿色颗粒

弱阳性:少量稀疏细小蓝色颗粒

阴性:无蓝色颗粒

1.粒系统

早期原始粒细胞:阴性(—)

晚期原始粒细胞及以后各阶段细胞:阳性,胞质含有蓝绿色颗粒,随粒细胞的成熟而增多。

嗜酸性粒细胞:阳性,颗粒更粗大,呈深蓝色。

嗜碱性粒细胞:阴性。

2.单核系统

早期原单:(—)

晚期原单→成熟:弱阳性

3.吞噬细胞:可呈阳性反应。

4.其他血细胞:皆为阴性。

↑淋巴细胞(-)

↑浆细胞(-)

↑红细胞系统(-)

主要应用是帮助鉴别急性白血病的类型:

急淋:-,阳性率≤3%(原幼细胞)

急非淋:+,阳性率3%

急粒:阳性反应;

急单:弱阳性反应。

↑急淋(-)

↑急粒(+)

↑急单(弱+)

——End——

预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇


转载请注明:http://www.whqunliang.com/tlyhxbxpxwh/8841.html


当前时间: