◇细胞化学染色:
是细胞学和化学相结合而形成的一门科学,是以细胞形态学为基础,结合运用化学反应的原理对细胞内的各种化学成分(如酶类、脂类、铁、蛋白质、核酸等),进行定位、定性、半定量分析的方法。
◇基本步骤
固定→显示→复染
一、铁染色
酸性
Fe3++亚铁氰化钾——→亚铁氰化铁
(普鲁士蓝)
固定:选髓粒丰富的骨髓片,用甲醇固定10min,水洗待干
↓
显示:用新配制的亚铁氰化钾染液C,染色30min
↓
水洗:流水冲洗至少5min
↓
复染:核固红染液复染3~5min
↓
镜检:流水冲洗,干后镜检。
◇细胞外铁:骨髓小粒巨噬细胞中的铁;
◇细胞内铁:红细胞胞质中含有的铁;
◇铁粒幼红细胞:胞质中含有铁粒的中、晚幼红细胞;
◇铁粒红细胞:含铁粒的成熟红细胞。
1.细胞外铁:低倍镜观察
↑(–):无铁粒可见
↑(+):少数铁粒或铁小珠
↑(++)有较多的铁粒和小珠
↑(+++)有许多铁粒、小珠和许多蓝色小块
↑(++++):有极多的铁粒、小珠和许多蓝色小块,密集成堆
2.细胞内铁:油镜下计数个中、晚幼红细胞,计算胞质中含有蓝色颗粒的细胞(铁粒幼红细胞)的百分率。
Ⅰ型:仅含1~2个铁颗粒。
Ⅱ型:含3~5个铁颗粒。
Ⅲ型:含6~10个铁颗粒。
Ⅳ型:10个铁颗粒。
环形铁粒幼红细胞:指幼红细胞胞质内含铁颗粒6个以上,并环绕细胞核排列超过核周径2/3以上者。
细胞外铁:+~++,多为++。
铁粒幼红细胞:12%~44%,以Ⅰ型为主,仅见少数Ⅱ型,不见环形铁粒幼红细胞。
1.缺铁性贫血
↑细胞外铁:明显减少或阴性。
↑细胞内铁:阳性率减低或0
铁剂治疗后内外铁均增多。
2.诊断铁粒幼细胞性贫血
↑外铁:明显增多。
↑环形铁粒幼细胞:增多。
3.骨髓增生异常综合征
↑伴环形铁粒幼红细胞增多的难治性贫血,环形铁粒幼红细胞15%,细胞外铁增加。
4.非缺铁性贫血
细胞外铁:正常或增加
细胞内铁:铁粒幼红细胞增加,以Ⅰ、Ⅱ型为主。
二、过氧化物酶(POX)染色
染色方法:
◇二氨基联苯胺法(DAB法)
◇过氧化物酶氨基-甲基卡巴唑法
◇二盐酸联苯胺法
◇四甲基联苯胺法
骨髓片或血片
↓
基质液0.5ml,1min
↓
过氧化氢0.7ml
↓
染色6min
↓
冲洗
↓
干后镜检。
强阳性:胞质中粗大深蓝绿色颗粒
弱阳性:少量稀疏细小蓝色颗粒
阴性:无蓝色颗粒
1.粒系统
早期原始粒细胞:阴性(—)
晚期原始粒细胞及以后各阶段细胞:阳性,胞质含有蓝绿色颗粒,随粒细胞的成熟而增多。
嗜酸性粒细胞:阳性,颗粒更粗大,呈深蓝色。
嗜碱性粒细胞:阴性。
2.单核系统
早期原单:(—)
晚期原单→成熟:弱阳性
3.吞噬细胞:可呈阳性反应。
4.其他血细胞:皆为阴性。
↑淋巴细胞(-)
↑浆细胞(-)
↑红细胞系统(-)
主要应用是帮助鉴别急性白血病的类型:
急淋:-,阳性率≤3%(原幼细胞)
急非淋:+,阳性率3%
急粒:阳性反应;
急单:弱阳性反应。
↑急淋(-)
↑急粒(+)
↑急单(弱+)
——End——
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